核酸检测技术之——ARMS-qPCR，基因点突变检测利器

收录于话题#分子诊断聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）因其快速、方便等优势，目前占据了临床分子诊断市场的90%。这种创新且简便的技术，是分子诊断领域的强大工具，也是如今许多主流癌症诊断的基础。随着医学研究的不断发展，肿瘤检测、靶向治疗随之越来越成熟。研究发现，许多癌症/遗传病与基因突变、病毒感染等具有显著关联，同时，靶向治疗的前提是对药物的分子靶点进行基因检测，找到导致肿瘤或遗传病发生的基因突变。ARMS-PCR即扩增阻滞突变系统PCR（Amplification Refractory Mutation System PCR，ARMS-PCR），又称为等位基因特异性PCR（Allele-Specific PCR，AS-PCR），是一项在PCR基础上发展起来的新方法，可检测出DNA中各种点突变，是目前国际上肿瘤个体化分子检测最重要、应用最广泛的技术之一，其在临床应用中的优势已被业内专家广泛认可。ARMS PCR的工作原理ARMS PCR引物设计时等位基因两条上游引物中3’端核苷酸不同，两条引物分别对野生型和突变型进行特异性扩增时，与模板不能完全匹配的上游引物将不能与模板完全形成互补碱基对，形成错配，一方面，碱基错配会影响产物延伸，另一方面，错配碱基会改变等位基因变体的退火温度，最终导致不同基因型扩增效果的差异，对差异进行检测即可确认基因型。滑动查看更多图1：ARMS-PCR的工作原理[1]ARMS-PCR产物的检测1琼脂糖凝胶电泳：取一定量PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过条带的位置来确定基因型。2熔解曲线分析：ARMS-PCR体系中加入染料/探针，对PCR产物进行熔解曲线分析，根据熔解曲线的位置来确定基因型。3实时荧光检测：采用TaqMan探针，通过分析荧光数据确认其基因型。目前市场主流即为该检测方式（ARMS-qPCR）。ARMS-PCR是遗传病诊断最准确的技术工具之一，在癌症/遗传病筛查和靶向治疗领域也有着重要贡献。其主要优势是操作便捷、快速、灵敏度高，对器材成本要求较低，有大量成熟的商品化试剂盒可供使用等。表1：国家药品监督管理局已注册ARMS相关检测试剂盒ARMS-PCR的高特异性要求从ARMS-PCR的原理上来看，该检测方法对PCR体系的特异性要求较高。保证特异性可以从以下两方面着手：1优化引物设计：常见手段之一是引入超过一个错配碱基，通常在3’端的倒数第二或第三位，与末端错配碱基共同作用，使不互补的扩增产物显著降低；同时减少PCR扩增的循环数，因为循环数增加会增加假阳性结果的几率。2调整反应体系中相关组分以提高反应体系的特异性。近岸蛋白全新推出针对ARMS方法调配的qPCR预混液（目录号：E406），具有超高的阻滞扩增性能。已进行多样本、多靶标验证，客户反馈性能优异，更有多重ARMS-qPCR预混液提供测试。点击此处即可申请产品特点高特异性：超高的阻滞扩增性能通用性好：经多样本、多靶标验证高稳定性：全预混体系37℃加速7天，产品性能不变数据展示高特异性超高的阻滞扩增性能，显著区分突变型与野生型（客户样本）。通用性好经多样本、多靶标验证扩增性能验证标准曲线R2达到0.999，扩增效率达100%左右。高稳定性全预混体系稳定性验证：在扩增体系中加入引物、探针，37℃存放0、1、3、5、7天，产品性能不变。质粒模板浓度梯度：10pg/μl、1pg/μl、100fg/μl、10fg/μl、1fg/μl、0.1fg/μl。客户项目及反馈1肿瘤相关基因突变的SNP分型，性能优于客户测试的其他品牌产品；2白血病融合基因检测，微滴式数字PCR（ddPCR）平台，性能优于客户测试的其他品牌产品。推荐产品：货号产品名称规格产品描述E406-01ANovoStart? High-Specificity Probe qPCR SuperMix (UDG)5ml针对ARMS法调整的探针法qPCR预混液，具有高特异性、高通用性的特点。产品获得多客户验证反馈，性能优异E406-01BNovoStart? High-Specificity Probe qPCR SuperMix (UDG)25ml相关产品：货号产品名称规格产品描述E416-01ANovoStart? High-Specificity Probe qPCR Kit (UDG)500次E406配方的酶和buffer分开形式E416-01BNovoStart? High-Specificity Probe qPCR Kit (UDG)2500次测试装NovoStart? Mμltiplex Probe ARMS-qPCR SuperMix (UDG)1ml针对ARMS法调整的探针法多重扩增qPCR预混液，具有高特异性、高通用性的特点。产品获得多客户验证反馈，性能优异E097-01AHotStart Taq DNA Polymerase (B) (with dNTP)250U抗体修饰热启动酶，高特异性，启动快速E097-01BHotStart Taq DNA Polymerase (B) (with dNTP)250U×5E097-02AHotStart Taq DNA Polymerase (B)250UE097-02BHotStart Taq DNA Polymerase (B)250U×5扫描二维码即刻申请试用装参考文献：[1] The Amplification Refractory Mutation System, Part of the Methods in Molecμlar Medicine? book series (MIMM,volume 16). Y. M. Dennis Lo苏州近岸蛋白质科技股份有限公司（简称近岸蛋白）深耕重组蛋白行业十余年，是一家专注于蛋白质技术与应用解决方案的高新技术企业，主营业务为生物药、体外诊断、mRNA疫苗药物、生命科学基础研究等领域的原料与技术解决方案，包括靶点及因子类蛋白、重组抗体、酶及试剂的研发、生产和销售及相关技术服务。公司在上海、苏州和菏泽建有研发、生产基地。访问www.novoprotein.com.cn或致电400-600-0940。点击“”，申请试用