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当质粒开始走极简主义,会有什么变化?

你有没有过这样的体验:手机里装了100个App,真正每天用的不到10个,剩下的全是“留着万一有用”——结果就是手机越来越卡,空间越来越小。其实,生物界的基因载体——质粒,也有同样的尴尬。

传统的质粒负重必要的基因表达框(启动子+目的基因+终止子)之外,还驮着细菌复制起点(Ori)、抗生素抗性标记、多克隆位点……这些东西在细菌扩增时有用,可一旦质粒进入哺乳动物细胞或人体内,就成了彻头彻尾的“行李”。这些多余的细菌DNA序列不仅毫无贡献,还会引发细胞的不必要免疫反应。

于是,一位“极简主义”的革命者登场了——微环DNA(minicircle)。


Minicircle是如何产生的?

微环DNA由全长微环亲本载体经PhiC31 整合酶催化生成;该酶可介导亲本微环上 PhiC31 attB 与 attP 位点发生位点特异性重组。该重组反应会产生两种产物:一是微环DNA(完全去除所有细菌骨架 DNA 序列);二是亲本质粒副产物。 为去除残留亲本质粒,I-SceI 内切核酸酶可特异性识别并切割亲本质粒上的 I-SceI 酶切位点,最终使亲本质粒被降解清除。

从亲代minicircle 生成minicircle的流程


Minicircle有哪些特点?

 游离型质粒表达可持续数周

无外源细菌骨架 DNA

分子片段更小,转染效率更高

目的基因插入无片段大小限制

搭配专属优化型大肠杆菌微环制备菌株

体外细胞实验、体内动物实验均可适

将1ug minicircle转染HEK293细胞可实现超过一周的强效基因表达

(A) 将2微克和4微克的minicircle(CMV-GFP-Luc)通过尾静脉注射到小鼠体内,在48小时后显示出优异的表达效果。(B) 与使用质粒DNA递送的转基因相比,minicircle递送的转基因能保持强劲的表达并持续数周,而质粒DNA递送的转基因表达会迅速丢失


代谢型荧光微环DNA应用

Absin 代谢物荧光探针搭载了微环DNA载体技术,结合胞浆、线粒体、细胞核三大亚细胞结构的精准定位设计,以及检测探针+对照探针的配套体系。

① 转染效率更高:去除所有细菌骨架序列,分子量更小,适配多种细胞类型

② 表达更稳定持久:表达水平远超传统质粒,满足长时程活细胞成像需求;

③ 生物安全性更高:无抗生素抗性基因,可用于活体动物、原代细胞等敏感研究场景

④ 多种检测方法:兼容酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪等检测设备

酶标仪读值

荧光显微镜读值

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货号

名称

规格/定位

用途

MN511A-1

pMC.CMV-MCS-EF1-GFP-SV40PolyA

10 μg

双独立启动子:CMV 驱目的基因,EF1α 单独驱 GFP;表达互不干扰

MN512A-1

pMC.CMV-MCS-EF1-RFP-SV40PolyA

10 μg

双独立启动子:CMV 驱目的基因,EF1α 单独驱 RFP;表达互不干扰

MN530A-1

pMC.EF1-MCS-IRES-GFP-SV40PolyA

10 μg

单 EF1α 启动子,IRES 串联 GFP,一条 mRNA 共表达

MN531A-1

pMC.EF1-MCS-IRES-RFP-SV40PolyA

10 μg

单 EF1α 启动子,IRES 串联 RFP,一条 mRNA 共表达

MN920A-1

MC-Easy Minicircle DNA Production Kit (Includes ZYCY10P3S2T producer E. coli strain)

5 preps

试剂盒自带 ZYCY10P3S2T 感受态,一步配齐

abs60641

Microcircle FiLa/Cytosol

胞浆(Cytosol)

监测细胞质内乳酸浓度变化,检测范围10 μM-2 mM

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Microcircle FiLa/Nucleus

细胞核(Nucleus)

监测细胞核内乳酸浓度变化,检测范围10 μM-2 mM

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Microcircle FiLa/Mitochondria

线粒体(Mitochondria)

监测线粒体内乳酸浓度变化,检测范围10 μM-2 mM

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Microcircle FiLa-L/Cytosol

胞浆(Cytosol)

高灵敏度监测细胞质乳酸,检测范围0.2 μM-200 μM

abs60645

Microcircle FiLa-L/Nucleus

细胞核(Nucleus)

高灵敏度监测细胞核乳酸,检测范围0.2 μM-200 μM

abs60646

Microcircle FiLa-L/Mitochondria

线粒体(Mitochondria)

高灵敏度监测线粒体乳酸,检测范围0.2 μM-200 μM

abs60647

Microcircle FiLa-C/Cytosol

胞浆(Cytosol)

FiLa/FiLa-L 的胞浆对照探针

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Microcircle FiLa-C/Nucleus

细胞核(Nucleus)

FiLa/FiLa-L 的细胞核对照探针

abs60649

Microcircle FiLa-C/Mitochondria

线粒体(Mitochondria)

FiLa/FiLa-L 的线粒体对照探针

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Microcircle SoNar/Cytosol

胞浆(Cytosol)

定量监测胞浆NAD+/NADH 氧化还原比率

abs60651

Microcircle SoNar/Nucleus

细胞核(Nucleus)

定量监测细胞核NAD+/NADH 比率

abs60652

Microcircle SoNar/Mitochondria

线粒体(Mitochondria)

定量监测线粒体NAD+/NADH 比率

abs60653

Microcircle iNapC/Cytosol

胞浆(Cytosol)

iNAP 系列 NADPH 探针的胞浆对照

abs60654

Microcircle iNapC/Nucleus

细胞核(Nucleus)

iNAP 系列的细胞核对照

abs60655

Microcircle iNapC/Mitochondria

线粒体(Mitochondria)

iNAP 系列的线粒体对照

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分子相关内容,咨询邮箱:molecular@univ-bio.com。

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