你有没有过这样的体验:手机里装了100个App,真正每天用的不到10个,剩下的全是“留着万一有用”——结果就是手机越来越卡,空间越来越小。其实,生物界的基因载体——质粒,也有同样的尴尬。
传统的质粒负重必要的基因表达框(启动子+目的基因+终止子)之外,还驮着细菌复制起点(Ori)、抗生素抗性标记、多克隆位点……这些东西在细菌扩增时有用,可一旦质粒进入哺乳动物细胞或人体内,就成了彻头彻尾的“行李”。这些多余的细菌DNA序列不仅毫无贡献,还会引发细胞的不必要免疫反应。
于是,一位“极简主义”的革命者登场了——微环DNA(minicircle)。
Minicircle是如何产生的?
微环DNA由全长微环亲本载体经PhiC31 整合酶催化生成;该酶可介导亲本微环上 PhiC31 attB 与 attP 位点发生位点特异性重组。该重组反应会产生两种产物:一是微环DNA(完全去除所有细菌骨架 DNA 序列);二是亲本质粒副产物。 为去除残留亲本质粒,I-SceI 内切核酸酶可特异性识别并切割亲本质粒上的 I-SceI 酶切位点,最终使亲本质粒被降解清除。
从亲代minicircle 生成minicircle的流程
Minicircle有哪些特点?
游离型质粒表达可持续数周
无外源细菌骨架 DNA
分子片段更小,转染效率更高
目的基因插入无片段大小限制
搭配专属优化型大肠杆菌微环制备菌株
体外细胞实验、体内动物实验均可适
将1ug minicircle转染HEK293细胞可实现超过一周的强效基因表达
(A) 将2微克和4微克的minicircle(CMV-GFP-Luc)通过尾静脉注射到小鼠体内,在48小时后显示出优异的表达效果。(B) 与使用质粒DNA递送的转基因相比,minicircle递送的转基因能保持强劲的表达并持续数周,而质粒DNA递送的转基因表达会迅速丢失
代谢型荧光微环DNA应用
Absin 代谢物荧光探针搭载了微环DNA载体技术,结合胞浆、线粒体、细胞核三大亚细胞结构的精准定位设计,以及检测探针+对照探针的配套体系。
① 转染效率更高:去除所有细菌骨架序列,分子量更小,适配多种细胞类型
② 表达更稳定持久:表达水平远超传统质粒,满足长时程活细胞成像需求;
③ 生物安全性更高:无抗生素抗性基因,可用于活体动物、原代细胞等敏感研究场景
④ 多种检测方法:兼容酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪等检测设备
酶标仪读值
荧光显微镜读值
热门货号
货号
名称
规格/定位
用途
MN511A-1
pMC.CMV-MCS-EF1-GFP-SV40PolyA
10 μg
双独立启动子:CMV 驱目的基因,EF1α 单独驱 GFP;表达互不干扰
MN512A-1
pMC.CMV-MCS-EF1-RFP-SV40PolyA
10 μg
双独立启动子:CMV 驱目的基因,EF1α 单独驱 RFP;表达互不干扰
MN530A-1
pMC.EF1-MCS-IRES-GFP-SV40PolyA
10 μg
单 EF1α 启动子,IRES 串联 GFP,一条 mRNA 共表达
MN531A-1
pMC.EF1-MCS-IRES-RFP-SV40PolyA
10 μg
单 EF1α 启动子,IRES 串联 RFP,一条 mRNA 共表达
MN920A-1
MC-Easy Minicircle DNA Production Kit (Includes ZYCY10P3S2T producer E. coli strain)
5 preps
试剂盒自带 ZYCY10P3S2T 感受态,一步配齐
abs60641
Microcircle FiLa/Cytosol
胞浆(Cytosol)
监测细胞质内乳酸浓度变化,检测范围10 μM-2 mM
abs60642
Microcircle FiLa/Nucleus
细胞核(Nucleus)
监测细胞核内乳酸浓度变化,检测范围10 μM-2 mM
abs60643
Microcircle FiLa/Mitochondria
线粒体(Mitochondria)
监测线粒体内乳酸浓度变化,检测范围10 μM-2 mM
abs60644
Microcircle FiLa-L/Cytosol
胞浆(Cytosol)
高灵敏度监测细胞质乳酸,检测范围0.2 μM-200 μM
abs60645
Microcircle FiLa-L/Nucleus
细胞核(Nucleus)
高灵敏度监测细胞核乳酸,检测范围0.2 μM-200 μM
abs60646
Microcircle FiLa-L/Mitochondria
线粒体(Mitochondria)
高灵敏度监测线粒体乳酸,检测范围0.2 μM-200 μM
abs60647
Microcircle FiLa-C/Cytosol
胞浆(Cytosol)
FiLa/FiLa-L 的胞浆对照探针
abs60648
Microcircle FiLa-C/Nucleus
细胞核(Nucleus)
FiLa/FiLa-L 的细胞核对照探针
abs60649
Microcircle FiLa-C/Mitochondria
线粒体(Mitochondria)
FiLa/FiLa-L 的线粒体对照探针
abs60650
Microcircle SoNar/Cytosol
胞浆(Cytosol)
定量监测胞浆NAD+/NADH 氧化还原比率
abs60651
Microcircle SoNar/Nucleus
细胞核(Nucleus)
定量监测细胞核NAD+/NADH 比率
abs60652
Microcircle SoNar/Mitochondria
线粒体(Mitochondria)
定量监测线粒体NAD+/NADH 比率
abs60653
Microcircle iNapC/Cytosol
胞浆(Cytosol)
iNAP 系列 NADPH 探针的胞浆对照
abs60654
Microcircle iNapC/Nucleus
细胞核(Nucleus)
iNAP 系列的细胞核对照
abs60655
Microcircle iNapC/Mitochondria
线粒体(Mitochondria)
iNAP 系列的线粒体对照
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分子相关内容,咨询邮箱:molecular@univ-bio.com。
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